OPREDELENIE TETRAETILTIURAMDISUL'FIDA V KROVI
- Authors: Morgacheva IV1, Kuznetsova EV1, Terskikh AP1
-
Affiliations:
- Issue: Vol 2, No 1 (2013)
- Pages: 212
- Section: Articles
- URL: https://new.vestnik-surgery.com/index.php/2415-7805/article/view/2481
Cite item
Full Text
Abstract
Full Text
Актуальность. Особое место в биофармации занимает определение содержания лекарственных веществ и их метаболитов в биологических жидкостях организма (крови и моче), так как, по мнению многих авторов, для объективной оценки терапевтической эффективности лекарственных средств (форм) необходимо изучение процессов всасывания, распределения, накопления и выведения лекарственных веществ. Подобные исследования в отношении препарата тетурам (тетраэтилтиурамдисульфид), который применяется в медицинской практике для лечения алкоголизма, были проведены. Однако, методики изолирования, очистки и количественного определения тетраэтилтиурамдисульфида в крови характеризуется длительностью выполнения, недостаточно высокими селективностью и чувствительностью. Целью исследования - разработка методики идентификации, очистки и количественного определения тетраэтилтиурамдисульфида в крови методом УФ-спектрофотометрии с предварительной очисткой и идентификацией методом тонкослойной хроматографии. Материалы и методы. В качестве объекта исследования рассмотрен тетурам (тетраэтилтиурамдисульфид), соответствующий требованиям ФС 42-0550630805 с содержанием основного вещества не менее 99%. В ходе эксперимента изучали особенности извлечения тетурама из крови. Кровь для исследования брали стабилизированную гемоконсервантом Фаглюцид. В качестве изолирующего агента применяли этилацетат. Для очистки, обнаружения и предварительной идентификации тетраэтилтиурамдисульфида, выделенного из биологической жидкости, использовали возможность применения хроматографии в тонких слоях нормальнофазного сорбента. В ряд химических стаканов с одинаковым количеством крови (5 мл) вносили различные, последовательно возрастающие количества анализируемого вещества (0,5, 2,0 и 5,0 мг). Один химический стакан оставили без тетраэтилтиурамдисульфида для получения контрольного образца. Приготовленные смеси, а также контрольные образцы выдерживали в течение 1,5 часов при температуре 18-22 ºС. По истечении заданного времени в химические стаканы вносили 5 или 10 мг ферментов пепсина и трипсина. В процессе исследования к отдельным порциям искусственных смесей или кон-трольных образцов прибавляли 5 мл этилацетата, взбалтывали и оставляли на 45 минут. Этилацетатные извлечения сливали в отдельные пробирки. Процесс настаивания твердого остатка в химических стаканах повторяли в тех же условиях. Первое и второе извлечения из модельной смеси объединяли в отдельной пробирке. 0,3 мл каждого извлечения наносили на линию старта хроматографической пластины типа «Сорбфил» UV-254. Параллельно на одну и ту же пластинку наносили раствор вещества-свидетеля. Хроматографировали в стеклянных камерах внутренним объёмом около 600 см3 с использованием в качестве подвижной фазы системы растворителей гексан-диоксан-пропанол-2 (15:5:1). После завершения процесса хроматографирования пластину вынимали из хроматографической камеры, высушивали и проявляли в УФ-свете. На полученных хроматограммах в УФ-свете наблюдали пятно тетраэтилтиурамдисульфида темно-фиолетового цвета. Анализируемое вещество идентифицировали по величине Rf, совпадающей с таковой вещества-свидетеля (Rf=0,875±0,02). Пятно тетраэтилтиурамдисульфида вырезали из хроматограммы вместе с участком пластинки, помещали в пробирку и элюировали вещество из сорбента ацетонитрилом в течение 15 минут. Оптическую плотность полученного элюата измеряли при длине волны 280 нм на спектрофотометре СФ-46 в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. Измерения проводили на фоне раствора, полученного в контрольном опыте. По величине оптической плотности определяли количество тетраэтилтиурамдисульфида, изолированного из биологического материала, используя при этом уравнение градуировочного графика у=0,118•10-5•х, (R2=0,9983). Определяли количество извлечённого антабуса в мг и% по отношению к навеске, предварительно внесенной в биожидкость. Обсуждение результатов. Использование гемоконсерванта и ферментов позволило существенно увеличить степень извлечения тетраэтилтиурамдисульфида из крови. Наилучшие результаты были получены при проведении ферментативного гидролиза путем добавления трипсина. Кроме того, использование гемоконсерванта улучшило реологические свойства крови, что позволило сократить время проведения анализа. Выводы. Использование гемоконсерванта Фаглюцид и ферментов пепсина и трипсина в количестве 5 позволяет существенно увеличить степень извлечения тетраэтилтиурамдисульфида из крови. Разработана методика идентификации и количественного определения тетраэтилтиурамдисульфида в извлечениях из крови с применением методов ТСХ и УФ-спектрофотометрии.×