INVESTIGATION OF POSSIBILITIES OF USING THE BROMTHYMOL BLUE NDICATOR AS EXPRESS DIAGNOSTICUM FOR OPTIMIZATION OF PHARMACOTHERAPY IN WOMEN WITH IMPAIRED VAGINAL BIOCOENOSIS

Full Text

Актуальность. Несмотря на разнообразие фармакотерапевтических препаратов для коррекции нарушений влагалищной микробиоты, эта задача достаточна сложна для решения. С одной стороны, микрофлора влагалища представлена очень большим количеством микроорганизмов (до 1000 видов) [1, 9]. При всем разнообразии современных диагностических возможностей бывает достаточно трудно идентифицировать возбудителя влагалищного заболевания, и поэтому лечение часто назначается симптоматически [4, 5]. Кроме того, симптомы вагинита или вагиноза очень часто слабо выражены, что также приводит к позднему началу лечения. С другой стороны, при появлении патологических влагалищных выделений очень многие женщины часто прибегают к самолечению, а не обращаются за медицинской помощью. Неадекватная терапия влагалищных заболеваний способствует хронизации процесса, появлению осложнений, а также развитию антибиотикорезистентности [3, 5, 7, 8]. Одним из информативных клинико-диагностических симптомов нарушения влагалищной микробиоты является изменение (в основном повышение) рН выделений. Нормальный рН влагалища - величина стабильная, колеблется от 3,8 до 4,6, составляя в среднем 4,0-4,2. Кислотно-щелочной баланс зависит от влагалищной микрофлоры и при любом клинически значимом ее изменении он будет меняться [2, 7, 9]. Изменение кислотности влагалищного содержимого - маркер целого ряда гинекологических заболеваний, таких как анаэробный вагиноз, аэробный вагинит, кандидоз, трихомониаз [7, 9]. Характерно, что кислотность влагалищный выделений меняется значительно раньше, чем появляются другие симптомы заболевания. Проведение pH-метрии в настоящее время является крайне желательной гинекологической манипуляцией, которую можно проводить непосредственно во влагалище, с выделениями, взятыми на поверхность влагалищного зеркала или в вагинальный тампон, на предметном стекле. Наиболее часто для этой цели используют индикаторную рН бумагу или специальные рН-метры, существуют тесты для самостоятельного проведения рН-метрии в домашних условиях [1, 2, 9]. На фоне лечения по мере восстановления микрофлоры рН постепенно нормализуется. Определение рН на уровне 4,0-4,4 в течение 4-х недель после окончания лечения - маркер восстановления влагалищного биоценоза [3, 4]. Гигиеническая прокладка, снабженная индикатором чистоты влагалищных выделений, предназначенная для ежедневного использования явилась бы решением проблемы экспресс-диагностики целого ряда серьезных гинекологических заболеваний. Наличие в ней тест-системы, реагирующей на изменение кислотности влагалищного содержимого, будет свидетельствовать о развитии гинекологического заболевания и послужит сигналом о необходимости обратиться за медицинской помощью. Главное достоинство предлагаемого исследования - совмещение ежедневного гигиенического ухода, который совершает каждая женщина, с одновременной экспресс-диагностикой. Для предлагаемого типа диагностики необходимо нанесение на прокладку раствора индикатора, который должен быть достаточно чувствителен к изменению рН среды, а также нетоксичным и гипоаллергенным. Материал и методы исследования. В работе были использованы следующие реактивы: бромтимоловый синий (ч.д.а.); этиловый спирт - 95% (х.ч.); глицерин (ч.д.а.), буферные растворы: стандарт-титры для приготовления буферных растворов - рабочих эталонов рН 3-го разряда СТ-рН-04.3. (состав фиксаналов приведён в статье [6]). В соответствии с ГОСТ 4919.1-77 «Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов» был приготовлен индикатор сравнения (эталон) по следующей методике: 0,01 г бромтимолового синего в 5 мл этилового спирта, раствор был доведен водой до общего объема 10 мл. Далее индикатор был приготовлен тремя следующими способами: Способ 1: 0,01 г бромтимолового синего растворяли в 5 мл глицерина, затем доводили водой до общего объема 10 мл водой; Способ 2: 0,01 г бромтимолового синего растворяли в 10 мл глицерина; Способ 3: 0,01 г бромтимолового синего растворяли в 10 мл воды. Далее было взято 0,5 мл (10 капель) индикатора (эталон), в которые постепенно добавлялись растворы с рН=4,01, 5; 6,86 и 9,18 до изменения окраски индикатора. Аналогичные эксперименты были проведены с индикаторами, приготовленными способами 1, 2и 3. Полученные результаты и их обсуждение. В качестве индикатора нами был выбран бромтимоловый синий (3’,3’-дибромтимолсульфофталеин) - кислотно-основный индикатор, малорастворимый в воде [10]. Бромтимоловый синий регистрирует изменения pH в диапазоне значений от 5,8 до 7,6, изменяя свой цвет с жёлтого на синий через оттенки зелёного. Нейтральные значения (pH=7,0) соответствуют травянисто-зелёному цвету. Значение константы диссоциации кислоты (pKa) для бромтимолового синего составляет 7,10. При приготовлении раствора индикатора в соответствии с ГОСТ 4919.1-77 (эталон) наблюдалось хорошее растворение индикатора, полученный раствор имел ярко-оранжевый цвет. При приготовлении раствора индикатора способами 1, 2 и 3 цвет раствора был менее насыщенным, хорошее растворение индикатора наблюдалось для всех трех способов. Далее было взято 10 капель индикатора (эталона), в которые постепенно добавлялись растворы с рН=4,01, 5; 6,86 и 9,18 до изменения окраски индикатора. Визуализация перехода цвета индикатора была наиболее затруднена при pH=4.01 - добавление 100 капель (5 мл) буферного раствора изменяло оранжевый цвет на желтый, при добавлении меньшего объема буферного раствора визуализация перехода цвета индикатора была затруднена из-за сходного (оранжевого) цвета самого индикатора. При добавлении 30 капель буферного раствора с pH=5 цвет изменялся на оранжево-желтый, но визуализация перехода цвета опять же была затруднена из-за сходного цвета самого индикатора. При добавлении уже 1 капли буферного раствора с pH=6,86 цвет индикатора резко изменялся с оранжевого на зеленый, а при добавлении уже 1 капли буферного раствора с pH=9,18 цвет индикатора становился малахитовым (дальнейшее добавление буферного раствора изменяло цвет на насыщенно-синий). В дальнейших опытах к 5 каплям раствора индикатора (приготовленного 1, 2 и 3 способом), с рН=4,01, 5; 6,86 и 9,18 добавляли буферный раствор до изменения окраски индикатора. Также проводилось сравнение окраски индикатора, приготовленного 1, 2 и 3 способом с эталоном сравнения. Для индикатора, приготовленного способом 1 для изменения цвета индикатора с оранжевого на желтый потребовалось добавление 60 капель буферного раствора (рН=4,01), в то время, как 30 капель данного раствора было достаточно для изменения цвета индикаторов, приготовленных способом 2 и 3. Для растворов индикатора, приготовленных способами 1, 2 и 3 требовалось 30 капель буферного раствора с рН=5,0 для изменения цвета из оранжевого на ярко-желтый. При добавлении одной капли буферного раствора с рН=6,86 цвет растворов всех индикаторов менялся на темно-зеленый. Изменение цвета при добавлении буферного раствора с рН=9,18 было различным для индикаторов, приготовленных различными способами. Добавление 12 капель буферного раствора с рН=9,18 изменяло цвет раствора индикатора, приготовленного способом 1 на болотный, добавление 25 капель буферного раствора приводило к появлению малахитового цвета, 40 капель - зеленовато голубого цвета и только добавление 70 капель буферного раствора приводило к появлению насыщенного синего цвета. Для изменения цвета индикатора, приготовленного 2 способом, требовалось добавление большего объема добавлении буферного раствора с рН=9,18. Так, болотный цвет появлялся при добавлении 20 капель буферного раствора, зеленый цвет - при добавлении 50 капель, зелено-синий цвет - при добавлении 100 капель и для достижения насыщенного синего цвета необходимо было добавить 160 капель буферного раствора. Для индикатора, приготовленного способом 3, добавление всего одной капли буферного раствора с рН=9,18 приводило к появлению насыщенного синего цвета. Выводы. Для оптимизации фармакотерапии у женщин с нарушением биоценоза влагалища можно использовать динамический контроль рН влагалищных выделений в динамике. Бромтимоловый синий является в целом походящим индикатором для динамического контроля за изменением рН влагалищных выделений. Бромтимоловый синий чрезвычайно чувствителен к рН >6, однако, требуется добавление 1.5 мл раствора с рН от 4 до 5 для визуализации изменений. Бромтимоловый синий хорошо растворяемся в воде и в глицерине, но водный раствор индикатора более чувствителен к изменению рН. Совокупность достаточной чувствительности бромтимолового синего в требуемом интервале рН и его высокой растворимости в глицерине и воде позволяет рекомендовать индикатор для дальнейших исследований.

About the authors

N. V. Khoroshikh

Voronezh State Medical University

Yu. Yu. Madykin

Voronezh State Medical University

V. O. Mittova

Voronezh State Medical University

A. A. Soloveva

Voronezh State University

References