Научно-медицинский вестник Центрального ЧерноземьяНаучно-медицинский вестник Центрального Черноземья1990-472XФедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный медицинский университет имени Н.Н. Бурденко" Министерства здравоохранения Российской Федерации96910.18499/1990-472X-2006-0-25-222-227Original ArticleINFLUENCE OF OXINICOTIN ACID AND ITS DERIVATIVES ON THE STATE OF IMMUNE REACTIVITY OF RATS IN THE CONDITIONS OF TOXIC HEPATOPATHYAvdeevaE V-Kursk State Medical University150920062522222713032020Copyright © 2006, Научно-медицинский вестник Центрального Черноземья2006The immunomodulating activity of oxynicotinic acid (XC-1) and its new acyl derivatives (XC-2, XC-3, XC-4, XC-9) was studied under conditions of acute toxic hepatopathy caused by the introduction of CCl. It was established that ONK and its derivatives dose of 1 TD) exert an immunomodulatory effect and their effectiveness increases in the sequence XC-1, XC-2 -> XC-3 ~ »XC-4 -» XC-9. The drug of comparison - mexidol in a dose of 20 mg / kg has a pronounced immunocorrecting action. The compound XC-4 (100 mg / kg) is equal to the activity of mexidol, the compound XC-9 (35 mg / kg) is superior in activity.oxynicotinic acidhepatopathyimmune reactivityоксиникотиновая кислотагепатопатияиммунная реактивностьАктуальность. Диффузные хронические поражения печени, причиной которых являются токсические вещества или вирусные инфекции, часто встречаются в медицинской практике. Нередко такие поражения, к которым, в частности, относится цирроз, приводят к тяжелым последствиям и представляют собой важную медицинскую проблему [13]. Токсические и инфекционные поражения печени характеризуются нарушением иммунологической реактивности организма, которое обусловлено изменением проницаемости мембран гепатоцитов, выходом в сосудистое русло и образованием в нем многочисленных соединений, влияющих на иммунную систему [9]. Для лечения печёночной недостаточности предложено множество методов. Наряду с классическими и широко применяемыми методиками лечения особое значение может иметь применение антиоксидантов, внедрение которых в комплексную терапию патогенетически оправдано. По мнению ряда авторов [4,12], применение антиоксидантов является одним из перспективных путей коррекции нарушений тканевого метаболизма. Учитывая антиоксидантные и противогипоксические свойства ряда производных оксиникотиновой кислоты (ОНК) [2,3,14], а также данные литературы о выраженном защитном действии мексидола при токсическом повреждении печени [6,10], представлялось интересным изучить иммуномодулирующую активность ОНК и её производных. Целью настоящей работы являлось изучение иммуномодулирующей активности ОНК и её производных (синтезированы в ВНЦ БАВ) в условиях острой токсической гепатопатии. Материал и методы исследования. Исследования проведены на 144 крысах Вистар массой 120-180 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 8 животных. В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника одновременно. Разброс в группах по исходной массе не превышал ±10%. Все исследования проводили в одно и то же время суток с 8 до 12 ч с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страс-бург, Франция, 1986). Животных выводили из опыта декапитацией под эфирным наркозом. Острый токсический гепатит воспроизводили путём внутримышечного введения 50% раствора четырёххлористого углерода (ССl4) на оливковом масле (3мл/кг) в течение 5 дней с интервалом 24 ч [8]. ОНК и её производные вводили пятикратно (интервал 24ч), внутрибрюшинно в экспериментально подобранных дозах (1ТД): ХС-1- 50 мг/кг, ХС-2 -100 мг/кг, ХС-3 -150 мг/кг, ХС-4 - 200 мг/кг, ХС-9 - 35 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали структурный предшественник оксиникотиновой кислоты - производное оксипиридина, с выраженными антиоксидантными свойствами - мексидол, который вводили внутрибрюшинно, в дозе 30 мг/кг, по той же схеме, что и исследуемые вещества. Развитие гуморального иммунного ответа (ГИО) и реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) индуцировали внутрибрюшинным введением эритроцитов барана (ЭБ). Для оценки выраженности ГИО в селезёнке определяли количество антитело- [11] и розеткообразующих клеток [5] через 5 суток после иммунизации (2 x 109 ЭБ). При оценке выраженности ГЗТ, через 4 суток после внутрибрюшинной сенсибилизации ЭБ (108 клеток), в подушечку задней конечности вводили разрешающую дозу антигена (106 ЭБ). Спустя 24 ч определяли разницу массы и количества кариоцитов в регионарном и контралатеральном лимфатических узлах [15]. Математический анализ полученных данных проводили с помощью программы «Statistica 6.0 StatSoft, USA». Первоначально, генерировался отчет описательной статистики, содержащий информацию о среднем числе, стандартной ошибке, стандартном отклонении, дисперсии выборки. Затем оценивалась достоверность различий по критериям Стьюдента, Вилкоксона-Манна и Уитни. Полученные результаты и их обсуждение. При изучении иммуномодулирующей активности ОНК и её производных, в условиях острого токсического поражения печени, установлено, что внутримышечное введение крысам в течение 5 дней оливкового масла не влияет на формирование ГИО, индуцированного ЭБ (рис.1). Введение четыреххлористого углерода повышает иммунологическую реактивность на ЭБ, что проявляется увеличением в селезёнке отравленных крыс числа иммунных АОК в 3,2 раза, РОК в 1,8 раза по сравнению с контрольной группой животных. Введение оксиникотиновой кислоты и её производного под лабораторным шифром ХС-2 не оказывает влияния на иммунологическую реактивность крыс отравленных СCL4. Введение соединения ХС-3 достоверно снижает количество иммунных АОК в 1,5 раза по сравнению с группой животных получавших СCL4. Также наблюдается тенденция уменьшения количества иммунных РОК под воздействием данного соединения (рис.1). Введение соединения ХС-4 как и препарата сравнения - мексидола, оказывает выраженное влияние на иммунную реактивность. Количество иммунных АОК и РОК в экспериментах с введением мексидола и ХС-4 было достоверно (p 0,05) ниже данных показателей полученных в эксперименте с введением СCL4. Рисунок 1. Влияние ОНК и ее производных на развитие ГИО индуцированного ЭБ в условиях острого токсического поражения печени. Примечание: 1- иммунизация ЭБ; 2- введение оливкового масла; 3- введение CCl4; 4-введение CCl4 и мексидола; 5- введение CCl4 и ХС-1; 6- введение CCl4 и ХС-2; 7- введениеCCl4 и ХС-3; 8- введение CCl4 и ХС-4; 9- введение CCl4 и ХС-9; * - p 0,05, цифры рядом со * указывают по отношению к какой группе различия достоверны. Особого внимания заслуживают эксперименты с применением соединения ХС-9. При его внутрибрюшинном введении, в течение 5 суток в дозе 35 мг/кг, показатели количества АОК и РОК оставались на уровне контрольных данных, не смотря на введение СCL4. Иммуномодулирующая активность соединения ХС-9 превосходит таковую у мексидола. Таким образом, иммунологическая реактивность животных на ЭБ существенно повышается в период острого токсического поражения печени СCL4. При введении соединения ХС-3 наблюдается тенденция уменьшения количества иммунных АОК и РОК. Внутрибрюшинное введение соединения ХС-4 и мексидола достоверно снижает количества АОК и РОК по сравнению с данными, полученными в группе животных с введением СCL4. Наибольший иммунокорригирующий эффект проявляет соединение ХС-9. Введение этого соединения на фоне интоксикации СCL4 полностью предотвращает повышение иммунологической реактивности на ЭБ. Было изучено влияние ОНК и её производных на развитие реакции ГЗТ, индуцированной ЭБ (рис.2). Исследование развития ГЗТ выявило аналогичную с ГИО динамику изменения показателей. Установлено, что максимальным корригирующим влиянием на показатели РМЛ и РКЛ, как и при токсическом поражении печени, обладает соединение под лабораторным шифром ХС-9. Внутрибрюшинное введение данного соединения в дозе 35 мг/кг оказывает выраженное гепатопротекторное действие, показатели РМЛ и РКЛ в данных сериях экспериментов не отличаются от контрольных данных. Препарат сравнения - мексидол и соединение ХС-4, проявляют одинаковую гепатопротекторную активность. В серии экспериментов с введением CCl4 применение мексидола и ХС-4 достоверно уменьшает показатели РМЛ в 1,8 и 1,5 раза соответственно, по сравнению с группой животных получавших только CCl4 (рис.2). ОНК (ХС-1) и другие её производные (ХС-2, ХС-3) достоверным иммунномодулирующим действием не обладают. Рисунок 2. Влияние ОНК и ее производных на развитие ГЗТ индуцированной ЭБ в условиях острого токсического поражения печени. Примечание: 1- иммунизация ЭБ; 2- введение оливкового масла; 3- введение CCl4; 4-введение CCl4 и мексидола; 5- введение CCl4 и ХС-1; 6- введение CCl4 и ХС-2; 7- введениеCCl4 и ХС-3; 8- введение CCl4 и ХС-4; 9- введение CCl4 и ХС-9; * - p 0,05, цифры рядом со * указывают по отношению к какой группе различия достоверны. Учитывая, что формирование иммунного ответа в норме и при патологии зависит от наличия и активности гуморальных факторов, выделяемых клетками селезенки в ответ на антигенный стимул (14), можно предположить, что иммуномодулирующий эффект производных ОНК связан с влиянием на выработку гуморальных факторов как иммуноцитами, так и клетками различных органов и тканей (в первую очередь, гепатоцитами). Наиболее активно этот процесс происходит при измененной иммунной реактивности в условиях патологии, характеризующейся нарушением процессов перекисного окисления липидов и, как следствие, нарушением целостности клеточных мембран. Иммуномодулирующее действие производных ОНК также может быть обусловлено их антиоксидантным и стабилизирующим влиянием на мембраны гепатоцитов. В наших предыдущих исследованиях (15) было показано, что производные ОНК, как и препарат сравнения - мексидол, ингибируют процессы ПОЛ, повышают антиоксидантную защиту в печени, нормализуют активность ферментов-маркеров повреждения гепатоцитов. Выводы. 1. Острая токсическая гепатопатия при введении CCl4 характеризуется повышением иммунологической реактивности на ЭБ. ОНК и её производные (доза 1 ТД) в этих условиях оказывают иммунномодулирующее действие и их эффективность возрастает в последовательности ХС-1, ХС-2 → ХС-3 → ХС-4 → ХС-9. 2. Препарат сравнения - мексидол в дозе 20 мг/кг обладает выраженным иммунокорригирующим действием. Соединение ХС-4 (100 мг/кг) равно по активности мексидолу, соединение ХС-9 (35 мг/кг) превосходит его по активности.1.Авдеева Е.В., Дьячук Г.И., Конопля А.И., Сернов Л.Н. Влияние оксиникотиновой кислоты и её производных на процессы перекисного окисления липидов в условиях токсического поражения печени// «Вестник СПбГМА им. И.И.Мечникова» 2005.- №4.- С.102-104.2.Аверкиев В.Л., Тарасенко В.С., Латышева Т.В. и др.Изменение некоторых иммунологических показателей при панкреонекрозе и их коррекция // Хирургия. - 2003. - №5. - С.31-34.3.Воронина Т.А., Смирнов Л.Д., Дюмаев К.М. // Тр. нац. науч. - практ. конф. с междунар. участием "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека".- Смоленск, 2001.- С. 191-193.4.Демин, Д.Б. Влияние регионарной лимфотропной и антиоксидантной терапии на экскрецию продуктов липопероксидации желчью при панкреонекрозе / Д.Б. Демин, В.С. Тарасенко, Д.В. Волков // IX Всерос. съезд хирургов (20-22 сентября 2000 г., г. Волгоград). - Волгоград, 2000. - С.139;5.Зауэр X. // Иммунологические методы / Под ред. Г.Фримеля; Пер.с нем.- М.: Медицина, 1987. - С.57-72.6.Иванов Ю.В., Матюшин И.А., Мишнев О.Д. и др. Действие мексидола при токсическом поражении печени.//Вестник новых медицинских технологий.-2003.-Т.Х, №3.-С.68-70.7.Кашкин К.Н. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунологическая активность // Клинич. лаб. диагностика. - 1998. - №11. - С. 21-32.8.Конопля, А.И. Эндогенные имуномодуляторы как фактор сохранения гомеостаза при патологии печени: Дис. …д-ра мед. наук. - Киев, 1989. - 312 с.9.Кулько И.Н. Изучение иммуномодулирующих и репаративных свойств эспалипона. Автореф. дис… канд. мед. наук.- Курск, 2004.-24 с.10.Лунева Н.В. Иммуномодулирующее, антиоксидантное и гепатопротекторное действие мексидола и персульфата натрия в условиях ишемии печени: Автореф. дисс.. канд. мед. наук.- Курск, 1998.-26с. П.Мальберг К., Зигель Э. // Иммунологические методы / Под ред. Г.11.Фримеля; Пер.с нем. - М.: Медицина, 1987.- С.57-72.12.Мишнев О.Д., Щеголев А.И. Печень при эндотоксикозах. - М.,-2001.-233с.13.Сакута Г.А., Кудрявцев Б.Н. Клеточные механизмы регенерации циррозной печени крыс.//Цитология.- 1996.- Т.38, №11.- С. 1158-1170.14.Смирнов Л.Д. Антиоксиданты гетероароматического ряда. Структура, активность, медицинское применение // Сбор, тезисов 2-го Съезда Росс. науч. общ. фармакологов. - М., 2003.- С.171.15.Федосеева В.Н., Порядин Г.В., Ковальчук Л.В. и др. Руководство по иммунологическим и аллергологическим методам в гигиенических исследованиях. - М.: Промедэк, 1993. - 320 с.