Научно-медицинский вестник Центрального ЧерноземьяНаучно-медицинский вестник Центрального Черноземья1990-472XФедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный медицинский университет имени Н.Н. Бурденко" Министерства здравоохранения Российской Федерации86910.18499/1990-472X-2005-0-22-46-49Original ArticleIZGOTOVLENIE ZUBNYKh PLASTIN DLYa MIKROSKOPIChESKOGO ISSLEDOVANIYa PRILEGANIYa KORNEVOGO GERMETIKA K DENTINU I GUTTAPERChEVYM ShTIFTAMSolov'evaA L-LeybovichB E-ZolotarevaI V-1512200522464913032020Copyright © 2005, Научно-медицинский вестник Центрального Черноземья2005Актуальность. Поиск оптимально приемлемого силера для использования на поликлиническом приеме является важной задачей современного эндодонтического лечения. Одним из основных факторов, обеспечивающих стабильные отдаленные результаты лечения, является герметичное пломбирование корневых каналов. Корневая пломба должна быть устойчивым и постоянным препятствием для микробной флоры околозубной среды. Клиническое использование новых эндодонтических материалов предполагает предварительное экспериментальное исследование их в лабораторных условиях. Для проведения микроскопического исследования прилегания корневого герметика к дентину и гуттаперчевым штифтам необходимо изготовить поперечные срезы зуба толщиной 5 - 8 мкм. Для получения срезов нужной толщины необходимо провести декальцинацию зубов, запломбированных исследуемым материалом. Сроки декальцинации зависят от плотности объекта, величины его и крепости декальцинирующего раствора. В среднем длительность декальцинации составляет 3-6 недель. Длительная декальцинация зубов в растворах соляной или азотной кислот приводит к нарушению связи между эндодонтическим материалом и стенками корневого канала, что может сказаться на чистоте эксперимента. После декальцинации образцы, по данным литературы, исследуются с использованием электронного микроскопа. Исследований твердых тканей зубов с использованием светопольного микроскопа в доступной нам литературе мы не встретили. Целью эксперимента явилось усовершенствование методики изготовления поперечных срезов зубов для микроскопического исследования прилегания корневого герметика к дентину и гуттаперчевым штифтам. Удаленные зубы препарируют, проводят стандартную химиомеханическую обработку корневых каналов, затем пломбируют гуттаперчей методом латеральной конденсации с использованием в качестве силера исследуемый материал. Так как данный материал не восприимчив к гистологическому окрашиванию, в процессе подготовки к исследованию предложено добавлять в него гематоксилин, проводить дальнейшее пломбирование, затем накладывать постоянную пломбу. Предварительное окрашивание способствуeт визуальному контрастированию материала и более точной оценке проникновения материала в дентинные трубочки. Образцы выдерживаются 48 часов в термостате при температуре 37°С в дистиллированной воде. После этого из апикальной средней и пришеечной части зуба алмазными дисками изготавливают тонкие костные пластины толщиной 0,5-0,7мм (см. рис.). Рис.1. Схематическое изображение распилов корня зуба при подготовке к микроскопическому исследованию. Декальцинация зубных пластин проводится в 37,5% растворе соляной кислоте с 15% раствором поваренной соли в течение 7 -14 дней (длительность декальцинации зависела от толщины костной пластины). Образцы фиксируют в 10% растворе формалина. Материал в дальнейшем проводится по стандартной методике с заливкой в среду Histomix. С помощью санного микротома получают срезы толщиной 5-8 мкм. Полученные срезы окрашиваются 2-мя способами: 1- гемотоксилином и эозином; 2- пикрофуксином по Ван-Гизону. Кроме того, полученные зубные пластины обрабатывают флюорохромом для изучения в люминесцентном микроскопе. Подготовленные образцы исследовали с помощью универсального (светопольного и люминесцентного) микроскопа «Leica - DMR» при увеличении ×400 и ×630. Полученные таким образом срезы позволили изучить прилегание материала к стенкам корневого канала без электронной микроскопии. Кроме того, значительно сократилось время декальцинации, что в свою очередь исключило артефациальные изменения, которые могли бы сказаться на чистоте эксперимента. Дополнительное окрашивание исследуемого корневого материала позволяет более точно установить проникновении герметика в дентинные канальца и сделать заключение об адгезивных свойствах материала. Разработанная методика направлена на усовершенствование методики гистологического исследования твердых тканей зуба. Заключительным этапом, определяющим качество эндодонтического лечения, является пломбирование системы корневых каналов зубов. В качестве основного средства обтурации корневых каналов используется гуттаперча различных модификаций и силер (паста или герметик). Использование силера является необходимым условием для достижения запечатывания апикального отверстия и для заполнения пространства между гуттаперчевым штифтом и стенками корневого канала. Качество корневых пломб, а также оценка герметизации корневых каналов с использованием различных видов отечественных силеров и их сравнение с зарубежными аналогами может быть проведено в лабораторных условиях. Важным в экспериментальном исследовании является адгезия герметиков не только к твердым тканям корневого канала, но и адгезия к гуттаперчивым штифтам. Для таких исследований используются человеческие зубы, удаленные по ортодонтическим показаниям. Зубы, используемые в эксперименте, включают различные органические остатки, они покрыты налетом, а также содержат штаммы микроорганизмов. После проведения стандартной инструментальной обработки системы корневых каналов нередко остаются продукты распада и частицы пульпы в полости зуба. Эти факторы оказывают неблагоприятное влияние на изучение плотности корневых пломб in vitro. Для проведения лабораторных исследований необходимо иметь стерильный материал, чтобы не нарушить качество эксперимента. Поэтому, перед использованием удаленные зубы подвергают тщательному очищению от органических остатков, налета и дезинфицируют в различных «агрессивных» растворах. В доступной литературе чаще всего встречается способ стерилизации удаленных зубов в растворе 3% гипохлорита натрия в течение 7 дней. Нами предложена новая методика стерилизации удаленных зубов в растворе 0,03 % анолита. Нейтральный анолит, вырабатываемый в установке СТЭЛ - 4н-69=02 путем электрохимической обработки раствора хлорида натрия в питьевой воде, представляет собой бесцветную прозрачную жидкость со слабым запахом хлора, содержащую высокоактивные кислородные соединения хлора, свободные радикалы хлора, кислорода и др. В зависимости от назначения получают и используют анолит с содержанием активного хлора 0,03 %, 0,05 %, 0,06 %. Анолит используют без разведения, однократно. Срок годности анолита составляет 5 суток при условии его хранения в закрытой стеклянной, пластмассовой или эмалированной емкости при комнатной температуре в местах защищенных от прямых солнечных лучей. Анолит обладает антимикробными (бактерицидным, туберколоцидным, вирулицидным, фунгицидным, спороцидным) и моющими свойствами. Анолит, по параметрам острой токсичности, при введении в желудок и нанесении на кожу относится к 4 классу малоопасных веществ по ГОСТ 12.1.007. При однократном воздействии не оказывают местно-раздражающего воздействия на кожу. Кроме того, 0,03% раствор анолита не вызывает раздражения органов дыхания и слизистых оболочек глаз персонала работающего с ним, поэтому для исследования был использован именно раствор с минимальным процентом концентрации. Высокая дезинфицирующая способность нейтрального анолита осуществляется за счет высокоактивных кислородных соединений хлора. Он обладает высокой бактерицидной активностью и по своей эффективности значительно превосходит известные дезинфектанты, такие как растворы гипохлорита натрия, хлорамина, перекиси водорода, септадора, жавелиона и др. Материал и методы исследования. Для проведения исследования были взяты удаленные по ортодонтическим показаниям однокорневые зубы (резцы, клыки, премоляры - 20 шт.) и многокорневые зубы (премоляры и моляры - 10 шт.). Удаленные зубы хранились в холодильнике в дистиллированной воде. Перед проведением исследования удаленные зубы подвергались тщательному очищению от органических остатков и налета. Для облегчения взятия материала из полости зуба анатомические коронки были трепанированы алмазным бором турбинным наконечником с воздушным охлаждением. Для экстирпации тканей пульпы применялся пульпэкстрактор. Каждый зуб во время подготовки к исследованию поддерживали влажной марлей для предотвращения обезвоживания. Механическая обработка корневых каналов не проводилась для исключения контакта исследуемого материала с другими химическими веществами. Полученные результаты и их обсуждение. После подготовки зубы были помещены в свежеприготовленный 0,03% раствор анолита на трое суток и отправлены в лабораторию для исследования стерильности материала. Для оценки качества стерилизации экспериментального материала проводили посев на стерильность по следующей методике. Из раствора анолита каждый зуб помещали в стерильные пробирки, заливали 1мл стерильной среды СКС (среда для контроля стерильности) и тщательно перемешивали в течение 1-2мин. Затем стерильной петлей брали взвесь и высевали на питательные среды (5% кровяной агар, шоколадный агар). Далее в пробирки с зубами добавляли ещё по 4мл среды СКС и вмести с посевами (чашки Петри) весь материал помещался в термостат на 24 часа при температуре 37°С. Через 24 и 48 часов производили просмотр чашек и пробирок. Дополнительно через 24 часа осуществляли повторный посев из пробирок с зубами и СКС на кровяной и шоколадный агар. Даже при отсутствии роста исследуемые образцы выдерживались в термостате при 37°С до 5 суток, и производился контрольный посев на те же питательные среды. В результате проведенных многократных посевов опытных образцов роста культур на питательных средах не обнаружено, что свидетельствует о стерильности удаленных зубов и позволяет использовать их для дальнейших экспериментальных исследований. В результате использования методики на кафедре оротопедической, пропедевтической стоматологии ВГМА им.Н.Н.Бурденко выявлен ряд преимуществ использования анолита, в отличие от традиционных дезинфицирующих и стерилизующих растворов (формальдегид, хлорамин, гипохлорит натрия, перекись водорода и др). Действующие компоненты анолита не оказывают вредного воздействия на организм человека. Сокращается время выдерживания удаленных зубов в растворе анолита до 3 суток, в отличие от раствора гипохлорита - 7суток.1.Резников К.М. Вода жизни. Прикладные информационные аспекты медицины. 2001. Т. 4. № 2. С. 2-6.2.Кунин А.А., Некрылов В.А., Казьмина С.Г., Олейник О.И., Шумилович Б.Р., Андреева Е.А. Оптимизация лечебных мероприятий в кариесологии. Прикладные информационные аспекты медицины. 1999. Т. 2. № 1. С. 33-37.