MODERN METHODS OF LABORATRI DIAGNOSIS OF ENTEROVIRUS INFECTION

Abstract


The article analyses the application of a complex of modern and classical methods of laboratory diagnosis to decrypt diseases enterovirus nature on the territory of the Voronezh region.

Актуальность. После сертификации Российской Федерации как свободной от полиомиелита страны, надзор за энтеровирусной инфекцией (ЭВИ) рассматривается одной из составляющих частей в постсертификационный период. Эпидемиологическая значимость энтеровирусной (неполио) инфекции определяется: высокой контагиозностью, широким распространением, возникновением вспышечной заболеваемости, отсутствием средств специфической профилактики, многообразием возбудителей ЭВИ, вызывающих полиморфизм клинических проявлений, возможностью тяжелых последствий вплоть до летальных исходов. По существу, современный взгляд на энтеровирусную инфекцию сформировался после утверждения обязательного ее учета в 2006 году. Учитывая актуальность энтеровирусной (неполио) инфекции в 2008 году была утверждена первая ведомственная целевая Программа «Эпидемиологический надзор и профилактика энтеровирусной (неполио) инфекции на 2009-2011гг». в 2011 году- вторая на 2012-2014гг. В соответствии с ведомственными программами были разработаны региональные. В настоящее время мы работаем по Программе, утвержденной на 2012-2014гг. В рамках реализации этих Программ выполнен большой объем организационных и практических мероприятий, а также научно-исследовательских работ. Разработан ряд нормативных и методических документов, в том числе СП 3.1.2950-11 «Профилактика энтеровирусной (неполио) инфекции». Значительно укреплена материально-техническая база лабораторий, осуществляющих исследования на энтеровирусы как материала от людей так и из объектов окружающей среды. Разработаны и внедрены в практику три набора реагентов для ПЦР - диагностики. Параллельно используется и вирусологический метод с применением клеточных культур Нер2, РД, Л20В. Работа по изучению ЭВИ проводится во взаимодействии с референс-центрами по мониторингу за энтеровирусными инфекциями (ФБУН «Нижегородский Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора) и ГУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П. Чумакова». Целью работы был анализ применения комплекса современных и классических методов лабораторной диагностики для расшифровки заболеваний энтеровирусной природы на территории Воронежской области. Материал и методы исследования. Клинический материал (мазки из ротоглотки, фекалии, ликвор) поступал из лечебно-профилактических учреждений г. Воронежа и области. Поступивший материал от больных и контактных исследовали вирусологическим и молекулярно-биологическим методами с применением клеточных культур Нер2, РД, L20Bи наборами для ПЦР «АмплиСенсEnterovirus-FL», «АмплиСенсEnterovirus71-FL» и «АмплиСенсPoliovirus-FL». Полученные результаты и их обсуждение.. В последние годы наметилась четкая тенденция активизации энтеровирусной инфекции в мире, о чем свидетельствуют постоянно регистрируемые в разных странах эпидемические подъемы заболеваемости и вспышки. География энтеровирусных инфекций чрезвычайно широка и охватывает все страны мира. В Российской Федерации эпидемический подъем ЭВИ начался еще в 2012году, а с начала июня 2013 года регистрировалась вспышечная заболеваемость, преимущественно в Центральном и Южном Федеральном округах. В Воронежской области, в сравнении с 2012 годом, в 2013 году зарегистрирован рост заболеваемости ЭВИ в 7,1раза, в том числе энтеровирусными менингитами в 11 раз. В круглогодичной заболеваемости ЭВИ прослеживается четко выраженная летне-осенняя сезонность с началом эпидемического подъема в июле, пиком в августе-сентябре (около 50% случаев заболеваний). В таблице №1представлен рост заболеваемости энтеровирусными инфекциями и энтеровирусным менингитом за последние шесть лет, начиная с 2008 по 2013годы. Таблица 1. Заболеваемость ЭВИ и ЭВМ в 2008-2013гг. Год 2008 2009 2010 2011 2012 2013 ЭВИ 52/2,27 45/1,97 8/0,35 30/1,33 24/1,03 173/7,4 ЭВМ 30/1,31 17/0,75 4/0,04 13/0,57 10/0,43 110/4,71 Показатель заболеваемости ЭВИ составляет 7,4 на 100 тыс. нас., что в 5 раз превышает среднемноголетний уровень заболеваемости (34 случая или 1,46 на 100 тыс. нас.) В структуре клинических форм ЭВИ преобладают энтеровирусные менингиты (ЭВМ), доля которых в 2013году составила 63,5%, 2012году - 41,7%, Показатель заболеваемости ЭВМ составляет 4,7 на 100 тыс. нас., что в 6,5 раза превышает среднемноголетний уровень заболеваемости (17 случаев или 0,73 на 100 тыс. нас.). В круглогодичной заболеваемости ЭВИ прослеживается четко выраженная летне-осенняя сезонность с началом эпидемического подъема в июле, пиком в августе-сентябре (около 50% случаев заболеваний). Основную роль в реализации механизма передачи ЭВИ играет водный фактор. Для расшифровки заболеваний энтеровирусной природы в вирусологической лаборатории широко используются современный метод ПЦР в реальном времени,обладающий рядом преимуществ: высокой специфичностью, чувствительностью и быстротой исполнения и вирусологический метод, позволяющий выделить и идентифицировать типэнтеровирусов. Комплексное применение этих методов диагностики является оправданным в силу ряда особенностей энтеровирусов: высокой изменчивости и различной степени выраженности цитопатогенного эффекта в отношении клеточных культур. Выделение вирусов-один из самых старых и трудоёмких методов диагностики. Однако и сегодня, выделение вируса с последующей идентификацией в ПЦР, является наиболее достоверным методом диагностики -так называемый «золотой стандарт». В представленной таблице №2 отчетливо прослеживается увеличение количества исследований в 2013 году в сравнении с прошлым годом. Таблица 2. Количество исследований от людей на энтеровирусы в 2012-2013гг. Год Всего обследовано лиц/проб Обследовано только методом ПЦР Кол-во РНК+ проб Из них исследовано в культуре клеток Кол-во положит.проб в культуре клеток 2012 570/648 79/85 13 10 3 2013 1550/2131 1513/2094 326 37 33 Из 1550 лиц, обследованных в 2013году - 247-больные,719-контактные, 86-дети групп риска, 498-другие контингенты (больные с диагнозами ОРВИ, ОКИ, катаральная ангина, гастроэнтерит). Такой большой объем исследований удалось провести благодаря применению экспресс- диагностики методом ПЦР. Всего за 2013год было проведено 2094 исследований методом ПЦР на энтеровирусы, РНК+обнаружена у 213 больных, что составило 27%, у контактных- 113РНК+, процент положительных находок 16%. Подъем заболеваемости наблюдался с июня по октябрь, что характерно для энтеровирусной инфекции. Вирусологическим методом было обследовано 305 больных, у 33 из них были выделены энтеровирусы.Результаты вирусологического обследования представлены в таблице 3. Таблица 3. Результаты вирусологического обследования различных контингентов на энтеровирусы в 2013 году. Контингенты Кол-во положит.проб в культуре клеток Тип выделенныхНПЭВ больные ЭВИ 15 Коксаки В5-3 ЕСНО3-1; ЕСНО6-2; ЕСНО16-5 ЕСНО18-1; ЕСНО30-3 контактные с ЭВИ 9 Коксаки В5-7 ЕСНО6-1; ЕСНО30-1 дети групп риска 7 Коксаки В5-2 ЕСНО3-1; ЕСНО6-2 адено-2 другие контингенты (ОРВИ, ОКИ, катаральная ангина, гастроэнтерит) 2 Коксаки В5-2 ВСЕГО: 33 Вирусологическая лаборатория тесно сотрудничает с референс-центром по мониторингу за ЭВИ (ФБУН ННИИИЭ им. Академика И.Н.Блохиной). Так, в 2013 году для генотипированияэнтеровирусов, обнаруженных в материалах от больных и контактных, в референс-центр было направлено 85 РНК+проб от 68 заболевших. Определен широкий спектр энтеровирусов,циркулирующих среди населения нашего региона. Это вирусы Коксаки В2, Коксаки В3, Коксаки В5, ЕСНО3, ЕСНО6, ЕСНО9, ЕСНО11, ЕСНО 16, ЕСНО18, ЕСНО 30, Коксаки А5, Коксаки А9.Особенностью минувшего сезонного подъема явилось обнаружение в Воронежской области энтеровируса 71-го типа(ЭВ71), который ранее мало циркулировал на территории страны и практически не встречался у нас, что предопределило его высокую эпидемическую значимость и послужило фактором его широкого распространения.В настоящее время ЭВ71 рассматривается как один из наиболее значимых патогенных агентов из числа энтеровирусов человека. Этот вирус характеризуется высокой нейропатогенностью, может вызывать крупные вспышки с летальными исходами. ЭВ71 - мелкий безоболочечныйРНК - содержащий вирус, относится к семейству Picornaviridae, роду Enterovirus, к виду HumanEnterovirus A (HEV-A). По основным физико-химическим и биологическим характеристикам ЭВ71практически не отличается от остальных энтеровирусов. Выводы. 1. В последние годы наметилась четкая тенденция активизации энтеровирусной инфекции как во всем мире, так и в Российской Федерации. 2. В целях ранней диагностики ЭВИ, своевременного начала противоэпидемических мероприятий вирусологическая лаборатория использовала современный экспресс-метод (ПЦР) в комплексе с «золотым стандартом». 3. Заболеваемость энтеровирусными инфекциями в 2013 году на территории области была вызвана широким спектром ЭВ. Выделен ЭВ 71-го типа, ранее не циркулирующий в Воронежской области.

O T Ageeva

FBUZ “Center of hygiene and epidemiologi in the Voronezh region”

I P Sergacheva

FBUZ “Center of hygiene and epidemiologi in the Voronezh region”

O P Shvetsova

FBUZ “Center of hygiene and epidemiologi in the Voronezh region”

  1. СП 3.1.2950-11 «Профилактика энтеровирусной (неполио) инфекции»
  2. МУ 3.1.1.2363-08 Эпидемиологический надзор и профилактика энтеровирусных (неполио) инфекций.
  3. Руководство по лабораторным исследованиям полиомиелита, ВОЗ 2005год.

Views

Abstract - 0

PDF (Russian) - 0

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies