MARKERS OF CELL PROLIFERATION Ki-67 AND ANTI-APOPTOSIS BCL-2 IN GUNSHOT INJURIES


Cite item

Abstract

The expression of immunohistochemical markers of proliferative activity of Ki-67 and anti-apoptosis Bcl-2 in gunshot injuries, which are less than 1 hour. Shows significant differences in the level of expression of antigens for different types at the same old injury. Proposed to use the expression level of anti-apoptosis and proliferation markers as additional criteria in determining the remoteness of gunshot injuries.

Full Text

Актуальность. Вскрытие трупов с целью установления причины смерти практиковалось еще в древности и в наши дни оно не потеряло актуальности. Тем не менее, современные реалий вносят свои коррективы в процесс детализации изучения медицинских знаний. Получают свою практическую реализацию новые, перспективные методы диагностики и лечения различных заболеваний [2]. Определение давности возникновения повреждения в мягких тканях является одним из важных вопросов в судебно-медицинской практике. В его решении большую, а иногда и основную роль играет гистологический метод исследования. При этом исследовании выявляются и оцениваются реактивные изменения, которые возникают в различные сроки посттравматического периода. Одним из основных показателей динамики заживления является пролиферация клеточных элементов в ране, в первую очередь макрофагально-гистиоцитарного ряда, которая происходит параллельно с накоплением лейкоцитов [1]. Оценка давности повреждений при механической травме традиционно ведется по степени выраженности и соотношения в пораженных тканях процессов альтерации, воспаления пролиферации и регенерации, Однако в судебно-медицинской практике оценка проявления этих процессов на гистологических препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, не всегда удовлетворяет экспертов. Получаемая информация, как правило, не отражает уровень дифференцировки клеточных элементов и степень зрелости тканевых структур, что приводит к существенной ошибке при интерпретации результатов гистологического исследования. Из-за этого возникает необходимость оценить пролиферативную активность клеточных элементов в ране более современными методами, основанными на иммуногистохимическом исследовании экспрессии маркеров пролиферации [2]. Одним из таких антигенов, достоверно ассоциированных с фазами клеточного цикла, является Ki-67. Экспрессия этого белка наступает во время пресинтетической фазы и нарастает в течение клеточного цикла [3]. В представленной работе оценивали экспрессию Ki-67 при тупой травме, давность которой была определена при гистологическом исследовании. Материал и методы исследования. Материалом для исследования послужили 32 случая тупой механической травмы. Фрагменты травмированных участков ткани фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживали, заливали в парафин, и изготавливали парафиновые срезы по рутинной гистологической методике. Затем их окрашивали гематоксилином и эозином и оценивали давность повреждения с помощью традиционной световой микроскопии [4]. В результате все наблюдения были разделены на 3 группы: в первой, с давностью травмы 1-6 часов, насчитывалось 9 случаев во второй группе с давностью 6-12 часов -12 случаев, в третьей, состоявшей из 11 случаев, давность повреждения была 96 часов (четверо суток). Иммуногистохимические реакции проводили на парафиновых срезах с тех же блоков с прменением моноклональных антител (МКАТ) к Ki-67 (Dako, Дания), используя стрептавидин-биотиновый метод. В качестве детекционной системы использовали LSAB2 System (Dako), в качестве хромогена - диаминобензидин (Dako) [5]. Пролиферативную активность клеток определяли по индексу Ki-67 по формуле: где IKi-67 - индекс Ki-67, X - количество иммунопозитивных к Ki-67 ядер в поле зрения микроскопа, Xi - общее количество подсчитанных ядер [6]. Подсчет производился не менее чем в 10 полях зрения, по 100 ядер в каждом из них. Полученные значения индекса подвергали математической обработке с применением методов вариационной статистики. Для каждой группы вычисляли среднее значение IKi-67 для каждой из групп М, ошибку репрезентативности m, сравнение полученных величин производили с применением критерия Ньюмена-Кейлса. Проводили также регрессионный анализ значений IKi-67 для повреждений различной давности с расчетом коэффициента детерминации R2 и уравнения регрессии. [7]. Расчеты производили с применением стандартных инструментов анализа Excel из пакета Microsoft Office 2007 for Windows 7. Полученные результаты и их обсуждение. Полученные результаты отражены в таблице 1 и рисунках 1-4. При травме давностью 1-6 часов экспрессия Ki-67 составила 1,29±0,34 %, для давности 6-12 часов возросла до 4,12±0,56 %, что достоверно выше чем значение в первой группе (р<0,01). Величина индекса Ki-67 в третьей группе с травмой давностью 96 часов составила уже 8,69±1,71% и это повышение также было статистически значимым (р<0,01). Достоверность разности значений индекса между 2й и 3й группами была несколько ниже, но статистическая значимость различий сохранялась (р<0,01). Таблица 1. Экспрессия маркера пролиферации Ki-67 при тупой травме различной давности Давность травмы (часы) 1-6 часов 6-12 часов 96 часов Индекс Ki-67 (M±m, %) 1,29±0,34** 4,12±0,56** 8,69±1,71 а Рис 1. Слабая экспрессия Ki-67 давностью 1-6 часов. Увеличение × 400 Рис 2. Умеренная экспрессия Ki-67 давностью 6-12 часов. Увеличение × 300 Рис 3. Выраженная экспрессия Ki-67 давностью 96 часов. Увеличение × 300 Рис 4. Индекс Ki-67 при различной давности тупой травмы. Уравнение зависимости величины индекса Ki-67 от давности травмы, полученое с применением полиномиальной функции имело вид: У=0,87Х2 -0,22Х+0,2 Коэффициент детерминации R2 был равен 0,998, что свидетельствует о высокой степени приближения полученной регрессионной функции к эмпирическим данным. Выводы. Определение экспрессии маркера пролиферации Ki-67 может быть использовано для определения давности нанесения повреждений при тупой травме мягких тканей, совместно с другими гистологическими методами. Уравнение экспрессии индекса Ki-67 от давности травмы при высоких значениях коэффициента детерминации R2 может быть использовано для прогнозирования показателя и, следовательно, для более точного определения давности травмы при малых временных интервалах, прошедших с момента нанесения повреждения.
×

About the authors

D V Bavykin

Voronezh State Medical Academy

V I Bachmetyev

Voronezh State Medical Academy

References

  1. Харин Г.М., Челышев Ю.А., Джорджикия Т.Р. Иммуногистохимический анализ динамики заживления кожных ран. / Г.М. Харин. и др. // Альманах судебной медицины. 2001; 2: 93-94.
  2. Фролова И.А. Определение давности повреждения мягких тканей при механической травме по морфологическим критериям / И. А. Фролова и др./. - Информационное письмо. - Москва. : 2007.-59 с.
  3. Bruno S., Darynkiewich Z. Cell cycle dependent expression and stability of the nuclear protein detected by Ki-67 antibody in HL-60 cells // Cell. Prolif. 1992; 25: 31-40.
  4. Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. Микроскопическая техника. Руководство для врачей / Д.С. Саркисов Ю.Л. Перов /.-1996.- 548 c.
  5. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. - 4-е изд., доп. и перераб. / Под ред. С.В. Петрова, Н.Т. Райхлина. - Казань, 2013. - 624 с.
  6. Ковязин В.А., Григорьян А.С., Катушкина А.А., Бабиченко И.И. Особенности экспрессии белка Ki-67 при лейкоплакии и плоскоклеточном раке слизистой оболочки полости рта. / В.А. Ковязин и др. /.- Стоматология. 2010; 6: 4-6.
  7. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. - 459 с.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies